Försiktighetsåtgärder för polyakrylamidgelelektrofores

· polyakrylamidGel måste med akrylamidmonomer, polymerisationens utgångsmaterial, katalysator och rätten till salt och buffertblandning tillsammans.

· akrylamidoch bis (n, n '- metylen dubbel akrylamid) är monomerform gelmatris.

· Ammoniumpersulfat Startlime polymerisationsprocess. Formuleringen av limet kräver 10% ammoniumpersulfatlösning framställd i vatten. Det mesta av informationen indikerade ett behov av aktivt användning. Emellertid kan 10% -lösningen placeras vid 4 ℃ under flera veckor utan betydande förlust av aktivitet. Gör upp till 10 ml och kassera när limet misslyckas med att aggregera.

Tips: procentandelen avakrylamidVid sekvensering är lim och proteinlim inte detsamma. Om du använder premade akrylamid: BIS -lösning, se till att få rätt flaska.

· Temed (n, n, n ', n'- tetrametyletylendiamin) är en katalysator, i en brun flaska, placerad i kylen. Tillsätt precis innan du häller lim.

· Polyakrylamidelektrofores som används glas i elektrofores bör tvättas före och efter varje gång. Efter elektrofores, tvätta med en mjuk borste och duk i varmt tvålvatten, skölj med destillerat vatten och står för att torka.

· Fukt och damm kan orsaka med ihålig polymer. Innan elektrofores, rengör glasplattan med glasrengörare och torka av den med en mjuk borste. Tvätta med destillerat vatten och torka noggrant med en pappersstorka. Sköljning med 70% etanol innan du torkar med papper hjälper till att rengöra och påskynda torkningen. Tillsätt prover av akrylamid successivt: BIS, vatten, buffertlösning, ammoniumpersulfat, temed. Skaka väl och häll omedelbart.

Det är inte nödvändigt att avgräva polyakrylamid före polymerisation. (Akrylamid placerades tidigare i ett vakuum för att avlägsna bubblor eftersom syre hämmar polymerisation.)

Horisontella limpunktprovtips.

· Lägg en bit svart papper i bottenlådan, svart bakgrund för att göra lite provhål för att se tydligare.
· Limtankfylld buffert, precis över kolloiden.
· Om kanten har ett ljus, slå på lamporna, låt ljuset lyser kolloid. Rita provet in i pipetten.
· Använda automatisk pipetteringsanordning.
· I 10-200 mu kan 1 flytande rörelsepunkt användas i de flesta punkter på provet. För mycket små provhål (mindre än 10μ1) är det långa pipetthuvudet som används för sekvenseringslim mer bekvämt.

· Pipettering bara nedsänkt i provet och inandas långsamt rörande vätska. Provet kan verka klibbigt med glycerin, och snabb pumpning kan dra luftbubblor i pipetthuvudet.

· Prover efter inandning av pipetteringshuvudet kommer att röra vätskehuvudet försiktigt på kanten av röret eller torka pappers sugande vätskehuvud utanför dropparna. Var försiktig så att du inte suga provet.

Placera provet i provhålet

· Pipetteringsanordning För att hålla lite tryck, gör proverna något att röra överflödet av vätskan.
· Pipetteringshuvudet insatt i bufferten, något högre än spothålen, bibehåller positivt tryck. Pipettens spets kan sättas in i ett litet hål.
· Långsamt och stadigt proverna. Pipettspetsen placeras ovanför punktprovhålet och provet sjunker ner i hålet. Låt provet sjunka för att fylla provhålet istället för att trycka in.
· När den sista droppen av prov med flytande huvud kommer vätska att röra sig till andra benet, långsamt höja vätskeflömmen, flytta ut ur buffert

Hur gör man vertikalt limprovtagning?

· Vertikala limpunktprovhål bildade mellan två glasstycken. I mycket tunt lim kan pipetthuvudet inte ens sättas in mellan två glasplattor. Se Glycerin! Lägg pipetthuvudet över provhålet så sjunker provet i hålet.
· Punktprov tidigare, se till att sätta den vertikala punkten för polypropen acylgelprovhål är sköljt rent. Tvätta bort den opolymeriserade akrylamiden och vattnet som kan visas i botten av provhålet. Vattnet kan göra provhålet betydligt mindre. Använd en 25 ml eller 50 ml spruta och en 18-gauge nål. Häll i elektroforesbufferten och spola försiktigt provhålet.
· Det kan vara svårt att se provhålet, men samtidigt är resten enkelt. Om det finns överskott av hål kan provbufferten testas med bromofenolblått.